Е.А. Корнюшенков, Е.Ю. Ушакова, С.А. Ягников
Клиника экспериментальной терапии НИИ клинической онкологии РОНЦ им. Н.Н.Блохина (Москва)

Г.Ш.Бурбаева
Лаборатория нейрохимии Научного Центра Психического Здоровья (Москва)

Сокращения: ИЭ- идиопатическая эпилепсия, СЭ- симптоматическая эпилепсия,  ГАМК-гамма-аминомасляная кислота, ГГЦ- ГАМК-, глутаматэргический цикл, ЦНС- центральная нервная система, ГМ- головной мозг, ЭП- эпилептиформные припадки, ЦТК- цикл Кребса, АЭП- антиэпилептические препараты.

Введение

Эпилепсия – хроническое заболевание головного мозга, характеризующееся повторными приступами, которые возникают спонтанно в результате чрезмерной нейронной активности и сопровождаются различными клиническими и параклиническими проявлениями.

ИЭ не является следствием какого-либо другого заболевания, её этиология не ясна, за исключением генетической предрасположенности, которая приводит к функциональному дисбалансу процессов возбуждения и торможения.

СЭ является проявлением врождённого или приобретённого заболевания головного мозга, которое уже прошло или в данный момент не активно, но привело мозг в состояние готовности к припадкам.

Термин «криптогенная эпилепсия» употребляется в тех случаях, когда клиническая картина припадка указывает на наличие в мозге локальной зоны эпилептической активности, связанной с нарушением морфологической структуры мозга, но выявить это нарушение какими-либо клиническими диагностическими методами не удаётся.

Традиционно диагноз «эпилепсия» ставится на основании следующих данных (схема 1).

В последние годы в гуманной медицине началась разработка нового метода дифференциальной диагностики судорожных припадков на основании определения удельной активности ферментов, задействованных в ГГЦ. Аналогичное исследование проводилось в КЭТ на базе лаборатории нейрохимии НЦПЗ.

ГАМК- основной тормозной, а глутамат — возбуждающий медиатор в ЦНС. Синтез и инактивация этих нейромедиаторов осуществляется через альфа-кетоглутарат цикла Кребса. Возможны также взаимопревращения ГАМК и глутамата. Данная система находится в состоянии динамического равновесия, которое поддерживается в соответствии с принципом Ле-Шателье Брауна следующими ферментами, находящимися в тромбоцитах крови:

  • трансфераза (ГСПБ),
  • глутаматдегидрогеназа (ГДГ),
  • ГАМК-трансфераза,
  • цитохром-С-оксидаза (участвует в метаболизме ГАМК в митохондриях),
  • активируемая фосфатом глутаминаза (ФАГ).

Чрезмерная активность нейронов ГМ, имеющая место при ИЭ, является следствием дисбаланса нейромедиаторов из-за сдвига динамического равновесия в сторону процессов возбуждения, на что указывает уровень ферментов в тромбоцитах крови.

Цели исследования

  • Установить, какие ферменты ГГЦ являются наиболее значимыми в развитии ЭП.
  • Оценить перспективность данного метода в дифференциальной диагностике ИЭ и СЭ.
  • Выяснить, возможна ли коррекция уровня этих ферментов с помощью современных АЭП, в частности, фенобарбитала.

Материалы и методы

Для эксперимента были отобраны собаки в возрасте 3-4 лет породы кане-корсо, находящиеся на лечении фенобарбиталом («Паглюферал»). Возраст собак, первично поступивших в клинику с жалобой на ЭП, составлял 2 года (лабрадор-ретривер) и 10 лет (ротвейлер). Обследование животных по вышеуказанной схеме не выявило патологий, которые могли бы послужить причиной ЭП. Предполагалось установить этиологию заболевания путём определения удельной активности ферментов ГГЦ  по специфическому анализу крови.

Исследование представляло собой взятие проб крови (натощак) объёмом 40 мл в стерильные пробирки, содержащие буфер. Параллельно проводился аналогичный анализ у контрольной группы здоровых животных, соответствующих больным собакам по массе тела и возрасту.

Результаты

Опыт (АЭП) Опыт (АЭП) Опыт (ИЭ) Опыт(СЭ) Контроль
Трансфераза 5,3 2,8 2,9 4,0 3,52±0,958
ГДГ 77,0 65,3 70,2 74,2 56,66±8,999
ГАМК-трансфераза 14,4 14,8 16,1 13,1 13,32±1,702
Глутаминаза 4,3 4,8 4,6 4,20±1,411
Цитохром-С-оксидаза 19,1 14,4 19,0 11,2 19,03±6,435

Наиболее показательными в диагностике ЭП среди ферментов ГГЦ являются ГДГ, ГАМК-трансфераза и цитохром-С-оксидаза.

Повышение уровня ГДГ, наблюдавшееся у всех животных с ЭП, указывает на избыточное содержание глутамата в ЦНС. При ИЭ это связано с патологическим повышением уровня ГАМК-трансферазы, инактивирующей ГАМК. Чтобы компенсировать недостаток нейромедиатора, активизируется цитохром-С-оксидаза, участвующая в синтезе ГАМК в митохондриях.

Результаты анализа крови собак, проходящих курс лечения АЭП, позволяют убедиться, что при ИЭ фенобарбитал блокирует активность ГАМК-трансферазы, позволяя поддерживать процессы возбуждения и торможения в коре ГМ в состоянии динамического равновесия.

Обсуждение

Полученные результаты позволяют предположить проведение данного исследования в качестве одного из методов дифференциальной диагностики ИЭ, а также, прослеживать динамику состояния животных, находящихся на противоэпилептической терапии, корректировать дозу и вид АЭП, решить вопрос об их отмене. Однако, небольшое количество данных не позволяет пока с уверенностью говорить о перспективности метода и требуются дополнительные исследования для подтверждения его эффективности.

SUMMARY

 

E.A.Kornushenkov, E.Y.Ushakova, S.A.Yagnikov. Clinic of Experimental Therapy of  N.N.Blokhin´s Russian Cancer Research Center.

G.S.Burbaeva. Laboratory of Neurochemistry Mental Health Research Center

The new trends in diagnostics of epileptiform seizure in dogs.

Tests for the evaluation of glutamatergic cycle enzymes activity in dog´s blood were performed.

GABA-transferasa, cytochrome-C-oxidase and glutamatdehydrogenase have the main diagnostic value among others enzymes in dogs with epilepsy. Such specific tests provide the information of the diagnosis, the evaluation of the disease dynamic and help to control the treatment plan in dogs with epilepsy.